显微镜镜头分辨率及目镜选择
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- 发布时间:2020-03-05 10:37
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分辨率的计算公式:
分辨率(r) = λ/(2NA)------------------------(1)
分辨率(r) = 0.61λ/NA-----------------------(2)
分辨率(r) = 1.22λ/(NA(obj) + NA(cond))-----(3)
此处r为分辨率(两目标之间的最小分辨距离);NA为显微镜的数值孔径;NA(obj)为物镜的数值孔径;NA(cond)为聚光镜的数值孔径。公式(1)和(2)中的系数是不一样的,在公式(1)中系数为0.5;在公式(2)中系数为0.61。这是由于计算时对物镜及聚光镜的影响考虑的因素不一样而产生的(包括不同的物理学家使用的计算理论的不一至),并无一绝对的值。通常而言,公式(1)用于自然光照明的显微镜,(2)、(3)用于电光源的显微镜。基本要求用户将聚光镜的数值孔径调至与物镜一致(事实上,因为用户操作的因素以及各厂家聚光镜机械精度的因素,不可能一致),这时,公式(2)、(3)是一致的,因此通常采用公式(2)。
蓝、绿光波长段为450nm—550nm,最适于显微观察照明。我们取λ=450nm,带入公式2,选择不同的倍数物镜的数值孔径,就能得到理想状态下的显微镜的分辨率,如附件图中所示
假设大家看得到图片了,来说说目镜的选择
人眼也存在着一个分辨率,大家还记得军训时打靶吗?靶子离远了,看起来就是一个点,分不清上面的图案。那么我们的眼睛的分辨率是多少呢?通常来讲,这个值是离眼睛250mm地方为0.17mm(250mm又叫做明视距离,在这个距离观察人眼最不易疲劳)(当然这个0.17也不绝对,譬如那些训练有素的神枪手能轻易打中几百米外我们看上去是一个点的靶心,而不少眼神不好的能分清0.3也算不错了)。从上图来看,以平场消色差为例(汗颜国内还不能生产复消色差),4X物镜的分辨率是0.00275mm,放大4X后也就是0.011mm,这个距离,就算是让最NB的神枪手来,也是分不清的。目镜的作用,就在于此。所以4X物镜应该配16X的目镜(0.011*16=0.176),10X也应该配16X目镜;25X(25X物镜数值孔径也是0.4)应该配10X目镜,40X、100X物镜也应该配10X目镜最接近。
说到这里,大家也应该能理解为各厂家设置的物镜的数值孔径的意义所在,同时也能打破看指标时的1600X的迷信,商家在宣传1600X这个指标的时候,只能说明他们的配置有100X物镜和16X目镜,并不能理解为这个显微镜就适合放大1600X来观察。
另外,因为10X目镜是大批量生产,所以通常各厂家的10X目镜做得更好,出瞳距比16X大得多,观察起来更方便。并且用户往往嫌频繁换目镜麻烦,所以16X的目镜就算卖去也一般都是个摆设
如上面所讲,可以推导出这个公式:
M1=619*NA/M2
这里,M1是最合适的目镜放大倍数,M2的某物镜的放大倍数,NA是该物镜的数值孔径
这样的物镜、目镜的搭配,可以使得显微系统最终成像在离人眼250mm的地方的分辨率为0.17mm,正好是人眼的极限;同时使得观察范围尽可能扩大(放大倍数越小的目镜视野范围越大)
当然,这只是一个理论上的数值,实际使用中,还需要考虑到用户操作的方便性、目镜制造成本以及等等因素
附上物镜、目镜搭配表
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